الرئيسية | الملخصات الجامعية | الخصائص الجزيئية لسلالات فيروس مرض التدهور السريع المعزول من أشجار الموالح في مصر

الخصائص الجزيئية لسلالات فيروس مرض التدهور السريع المعزول من أشجار الموالح في مصر

حجم الخط: Decrease font Decrease font Enlarge font

هاله عبدالله أمين على عين شمس العلوم الميكروبيولوجى دكتوراة 2004

 

"يعتبر فيروس التدهور السريع في الموالح من أكثر الآفات التي تصيب محصول الموالح.. حيث أنه يتسبب في خسائر اقتصادية فادحة في صناعة الموالح على مستوى العالم. ونظراً لأن الأعراض المرضية تعتمد أساساً على طبيعة السلالات الفيروسية والعوائل المصابة. فإن الإصابة بهذا الفيروس قد تؤدي إلى تدهور وموت ملايين من أشجار الموالح المطعومه على أصول النارنج. وقد يكون هذا التدهور سريعاً، ولكن في معظم الأحيان قد يظهر تأثيره بعد عدة أشهر أو عدة سنوات. وهذا يلزمه الكشف السريع لتحديد السلالات الفيروسية المختلفة من الناحية البيولوجية والسيرولوجية وذلك باستخدام طرق سريعة وحساسة للكشف المبكر. ومن هنا أتت فكرة هذه الدراسة في استخدام أفضل الطرق سرعة وحساسية للكشف المبكر عن فيروس التدهور السريع في أشجار الموالح..

 

و قد أعتمد الكشف عن فيروس التدهور السريع في الموالح (التريستيزا) في هذه الدراسة على استخدام تقنية الأليزا (ELISA  ) لتحديد وجود الفيروس في العزلات المختلفة وذلك باستخدام المضادات عديدة النسل، وأحادية النسل المتخصصة، كما أننا اعتمدنا على الطرق الجزيئية مثل طريقة الأدمصاص المناعي/ والنسخ العكسي- لتفاعل أنزيم البلمرة المتسلسل (IC/RT-PCR)  وتفاعل النسخ العكسي وأنزيم البلمرة المتسلسل (RT-PCR),  وتهجين الحمض النووي باستخدام طريقة التهجين التنقيطي والصزرن. بالإضافة إلى ذلك،  فإننا استخدمنا طرق جزيئيه وسيرولوجية أكثر دقة للتفرقة بين السلالات المصرية المختبرة وذلك في محاولة لإيجاد أداة بسيطة وسريعة للتمييز بين هذه السلالات المختلفة للفيروس, ومن هذه الطرق استخدام المضادات أحادية النسل وطريقة تفاعل أنزيم البلمرة المتسلسل ثنائي الاتجاهات BD/PCR، وأيضاً استخدام الأشكال المتعددة الأطوال للأجزاء الناتجة من قطع الحامض النووي ((RFLP.

 

وكان أحد أهم أهداف هذه الدراسة هو أنتاج المصل المضاد عديد النسل لفيروس التريستيزا وذلك باستخدام الغلاف البروتيني المعاد تركيبه للفيروس والمعبر عنه جينياً داخل الخلية البكتيرية واستخدام هذا المصل المضاد فى الكشف السريع والمبكر عن الفيروس.

 

و يمكن تلخيص نتائج هذه الدراسة كما يلي:

 

1.     أوضحت الدراسة أن الحساسية العالية لطريقة الأدمصاص المناعي/والنسخ العكسي- لتفاعل أنزيم البلمرة المتسلسل IC/RT-PCR، قد ساعدت في الكشف عن التركيزات المنخفضة للفيروسات (التريستيزا) الموجودة في اللحاء وقد أمكن باستخدام هذه التقنية في الحصول على حوالي 700 قاعدة نيكليوتيدية وهي تمثل الطول الكلي للجين الخاص بالغلاف البروتيني بمنطقة الP25..

 

2.     تفاعلت خمس عزلات سلبياً من إجمالي خمسة عشر عزلة لفيروس التريستيزا مع الأجسام المضادة وحيدة السلالة (12D+C mix) من خلال تقنية الأليزا وهذه العزلات قد تسبب أعراض إصابة على الليمون المكسيكي إلا أنها لم تؤدي إلى تدهور ملحوظ في البرتقال المطعوم على أصل النارنج فيماعدا عزلة أنشاص 156 “AN156” التي أظهرت أعراض نمطية للتدهور السريع (وهى أحد هذه العزلات الخمس).

 

3.     تعتبر الأجسام المضادة عديدة النسل  (PAbs)أداة مفيدة جداً في الكشف السريع عن عزلات فيروس التريسنيزا كعمل روتيني معتاد إلا أن الأجسام المضادة أحادية النسل (MCAs) قد أفادت في التعرف على معظم العزلات التي لها سطح خارجي للبروتين epitope ذو علاقة بها.

 

4.     أثبتت تقنية ال IC/RT-PCR أنها كانت عالية الحساسية في التعرف على العينات المصابة التي أعطت نتيجة سالبة مع الأليزا (ELISA) وهذه التقنية لها أهمية بالغة كأداة جيدة في برامج زراعة وإنتاج أمهات حمضيات خالية من الفيروسات. وأكدت التجارب أن هذه التقنية  (IC/RT-PCR)تتفوق على نظيرتها  RT-PCRوالتي تعتمد على استخلاص  الحمض النووي .(TNA)

 

5.     تم استخدام أسلوب التهجين بطريقة الصزرن Southern blot hybridization لتحديد وتأكيد نواتج تفاعل RT-PCR في الكشف عن الفيروس. وقد أعتبرت طريقة التهجين التنقيطي hybridization dot blot طريقة حساسة للكشف عن العزلات المختلفة وأمكن من خلالها اختبار عيون الطعم budwood كعمل روتيني في برامج التقييم. هذا الإجراء السريع والحسّاس يمكن أن يطبق على العديد من العينات، تحت الظروف الحقلية ويفتح الطريق لمراقبة وتعقب حركة سلالات التريستيزا في الدراسات البيئية.

 

6.     أثبتت التجارب أن الأجسام المضادة أحادية النسل (MCA13) مفيدة خاصة في التمييز بين سلالات التريستيزا لأنها تتفاعل إيجابياً مع معظم السلالات شديدة الإصابة كما لوحظ أن هذا التفاعل الإيجابي لم يرتبط بتدهور الشجرة، بينما فقدت الأجسام المضادة أحادية النسل    (3CA5)حساسية التمييز بين العزلات الحادة والضعيفة الأثر.  وبشكل عام فإن الأجسام المضادة أحادية النسل من نوع (3DF1) و (3CA5) لم تعط تمييزاً واضحاً بين العزلات المستخدمة في الدراسة.. ذلك لأن السطح الخارجي المتخصص(Epitope) يمكن أن يوجد في كلا العزلتين الشديدة والضعيفة.

 

7.       أثبتت تجارب الأجسام المضادة أحادية النسل (MCA13) أن هناك ثلاث عزلاتAN5)  و AN-B و (AN1417 تظهر عليهم أعراض مرفولوجية واضحة كان تفاعلهم سلبياً وذلك يشبه لحد كبير عزلة فلوريدا T30 الضعيفة ( Mild ). بينما أظهرت العزلتان AN69) و (AN1510 تفاعل سلبي رغم أنهما لم يظهرا أعراضاً ملحوظة أو تدهور على طعم البرتقال أو على أصل النارنج وكذلك الليمون المكسيكي مما يؤكد أهمية استخدام الأجسام المضادة في تحديد نوع العزلة بصرف النظر عن الأعراض الظاهرية على الأشجار المصابة

 

8.     أكدت الدراسة أن الأجسام المضادة أحادية النسل MCA13)) رغم أهميتها لم تثبت بدقة هوية العزلات المستخدمة في الدراسة نظراً لأن النتائج الإيجابية قد لا تعني أن العزلة المختبرة عزلة حادة أو خليط من العزلة الحادة والضعيفة على نفس النمط مع MCA13 وفي حالة ما إذا كانت العينات سلبية التفاعل لم يعني ذلك أنها غير مصابة أو قد تكون مصابة بعزلة ضعيفة أو بتركيز منخفض من الفيروس لا يمكن قياسه. لذلك فإننا نستخلص أننا بحاجة لاستخدام اختبارات أخرى موازية بجانب استخدام الأجسام المضادة عديدة أو أحادية النسل.

 

9.     أمكن باستخدام تفاعل أنزيم البلمرة المتسلسل ذو الاتجاه الثنائي   (BD/PCR) الكشف السريع عن الإصابة بخليط من السلالتين الحادة والضعيفة لفيروس التريستيزا في الشجرة الواحدة بالإضافة إلى إمكانية استخدامه في الكشف عن السلالة الحادة أو الضعيفة في الأشجار المصابة، ويعتبر تحديد السلالة الضعيفة مبكرا وبدقة من خلال هذه التقنية هام و مفيد في برنامج الحماية المتبادلة.

 

10.   أكدت النتائج أن استخدام أنزيم القطع Hinf 1 للحامض النووي الفيروسي في تقنية الأشكال المتعددة الأطوال  (RFLP)كان له تأثير إيجابي في التفرقة بين العزلات الضعيفة (AN510) و العزلات الحادة (AN156 &AN155) بينما لم يظهر أنزيم Rsa 1 هذا الأثر في التمييز بين العزلات.

 

11.   أمكن بواسطة الأشكال المتعددة الأطوال للأجزاء الناتجة من القطع (RFLP)   تحديد مكان ووضع العزلات المصرية ودرجة تشابهها مع العزلات الأخرى وذلك من خلال مقارنتها بخريطة مجموعة الأشكال المتعددة الأطوال للأجزاء الناتجة من القطع للعالم ""جيلينجس ""، حيث وجد أن العزلة المصرية الحادة قريبة للمجموعة الثانية (RFLP2) وتشبه في ذلك العزلة الأسترالية الحادة، أما العزلة الضعيفة فقد أعطت نمطاً للـ RFLP مختلفاً عن العزلة الحادة حيث أظهرت الخريطة أنها ضمن المجموعة السابعة (RFLP7) التي تشبه عزلة كاليفورنيا. وعلى ذلك نستخلص أن العزلات المصرية لفيروس التريستيزا تحتوى على أنواع جينية مختلفة من السلالات.

 

12.   أكدت النتائج أن الطول الكلي للجين الخاص بالغلاف البروتيني بمنطقة ال P25 (حوالي 700 قاعدة نيكليوتيدية) قد أعيد تركيبه داخل ناقل خاص بالتعبير الجيني Pinpoint Xa3 تحت سيطرة الحافز Tac Promoter. كما تم استحثاث ترجمة هذا الإستنسال بدئاً بالحامض الأميني الثاني لجين الغلاف البروتيني لفيروس التريستيزا. و تعتبر هذه التقنية في إنتاج البروتين الناتج عن التعبير الجيني لجين الغلاف البروتيني لفيروس التريستيزا أكثر كفاءة و قدرة في الاستخدامات المناعية بعد ذلك.

 

13.   كان لإنتاج البروتين البكتيري المتحد بالبيوتين ((BBP كجزء طرفي عند النهاية الطرفية – N للحامض الأميني للغلاف البروتيني لفيروس التريستيزا (13 كيلو دالتون)  والمنبثق من الناقل بالإضافة إلى الغلاف البروتيني للفيروس والذي يصل حجمه إلى 25 كيلو دالتون وبذلك أصبح البروتين الناتج عن التعبير الجيني لجين الغلاف البروتيني (BBP-rCTV-CP) المعاد تركيبه مع الناقل يعطي بروتين ذو حجم نهائي 38 كيلو دالتون. وقد أعطى هذا البروتين الناتج تفاعل واضح مع ستريبتافيدن المقترن بإنزيم الفوسفاتيز القلوي الخاص بالكشف عن البيوتين عند الكشف عنه بطريقة ويسترن Western، بالإضافة إلى أنه أعطى تفاعل إيجابي مع الأجسام المضادة لفيروس التريستيزا في تحليل الإليزا والإتحاد المناعي النقطي (DIBA) كما أنه أبدى تخصصية وأنتيجينية عالية.

 

14.   تم إنتاج المصل المضاد ضد البروتين الفيروسي المتحد بالبيوتين (38 كيلو دالتون) وقد أظهر كفاءة عالية عند استعماله في الإليزا الغير مباشرة (I-DAS-ELISA) حيث أستطاع المصل المضاد عند تخفيفه إلى مستوى يصل إلى 10-4 أن يكشف بكفاءة عن فيروس التريستيزا في العينات المصابة. كما أظهر المصل المضاد المنتج تفاعل واضح على نطاق واسع تجاه العزلات المصرية المختلفة لفيروس التريستيزا. يضاف إلى ذلك أنه قد يساعد في تحضير مجموعة تشخيص ذات كفاءة تعتمد منفردة على المصل المضاد المنتج ضد الغلاف البروتيني المعبر جينيا لفيروس التريستيزا لاستعمالها بواسطة الأليزا. وبذلك يتحقق ما كنا نصبو إليه عند اقتراح فكرة هذه الرسالة. ونأمل أن يكون هذا المصل المضاد هو الأمل في الكشف المبكر والسريع عن فيروس التريستيزا الذي يصيب محصول الموالح المصرية ويلتهم معظمها.. ومن هنا تأتي أهمية هذه الدراسة."

 

بيانات الكاتب

مركز النظم للدراسات  وخدمات البحث العلمي مركز النظم للدراسات وخدمات البحث العلمي يُعد مركز النظم للدراسات وخدمات البحث العلمي أحد المراكز العلمية المتميزة في مجاله لما يقدمه من خدمات راقية تغطي كافة احتياجات طلاب وطالبات الدراسات العليا ، حيث يضم المركز بين جنباته كفاءات علمية عالية تم اختيارها بدقة وعناية لتقديم أفضل الخدمات الممكنة، فمنذ تأسيسه عام 1421هـ وهو يسير بخطوات واثقة لمساعدة طلاب الدراسات العليا، ومد يد العون لهم، في كافة المجالات والتخصصات ، من مختلف المراحل الماجستير والدكتوراه.
  • أرسل إلى صديق أرسل إلى صديق
  • نسخة للطباعة نسخة للطباعة
  • نسخة نصية كاملة نسخة نصية كاملة

علامات مرتبطة:

لا توجد علامات لهذا الموضوع

من اختيارات المحررين

أحمد بن نعمان دحان ... تفاصيل أكثر
أحمد جمال حسن محمد _ دكتوراه_ جامعة المنيا _ كلية التربية النوعية_ قسم الاعلام التربوي_ 1439_ 2018 ... تفاصيل أكثر
اسم الباحثة هناء بنت محمد أبا الخيل..الجامعة الأردنية..الكلية العلوم التربوية..القسم الإدارة التربوية..دكتوراه..2017 / 2018 ... تفاصيل أكثر
فيما يلي استعراض أبرز خدمات المركز .. ولخدمات أخرى لم تذكر.. فضلا التواصل عبر الايميل nodom@alnodom.com.sa v  عنوان الرسالة v توفير المراجع والدراسات السابقة باللغة العربية والأجنبية vالاحصاء والتحليل vالترجمة العلمية vالنسخ والطباعة vالمراجعة ... تفاصيل أكثر
اسم الباحث: عبدالرحمن بن عبدالعزيز بن إبراهيم العمير. اسم المشرف: د. أحمد بن عبدالعزيز الرومي. اسم الجامعة: جامعة الإمام محمد بن سعود الإسلامية اسم الكلية: كلية العلوم الاجتماعية – قسم أصول التربية – تخصص التربية الإسلامية. العام الجامعي: 1438ه- 1439ه، الموافق 2017م - 2018م ... تفاصيل أكثر

من المقالات الجديدة

نظام تدريبي مقترح لتنمية مهارات القيادة التحويلية لدى القيادات الإدارية بوزارة التربية والتعليم بالجمهورية اليمنية

إعداد الباحث/ صالح أحمد حسن البربري، رسالة دكتوراه، قسم الإدارة العامــة، كليـــة العلوم الإدارية،جامعة القرآن الكريم والعلوم الإسلامية ،جمهـــورية الســــــــــودان، 2019- 2020م

معوقات وحدات التدريب وأثرها في كفاءة وفاعلية التدريب دراسة ميدانية في مكاتب التربية والتعليم بمديريات محافظة الجوف– الجمهورية اليمنية

إعداد الباحث/ صالح أحمد حسن البربري-رسالة مقدمة كمطلب لنيل درجة الماجستير- 2011- 2012م - قســـم العلــوم السياسيــة - شعبـة الإدارة العامــة- كليـــة التجـارة والاقتصـاد-جـامعــــة صنعـــــــــاء- الـجمــهوريـــة الــيمــنـيــــة

رؤية منهجية مُقترحة لتطبيق التربية الإعلامية على طُلاب الجامعة المُتخصصين وأثرها على جودة إنتاجهُم للرسائل الإعلامية

أحمد جمال حسن محمد _ دكتوراه_ جامعة المنيا _ كلية التربية النوعية_ قسم الاعلام التربوي_ 1439_ 2018

تعارض النصين العامين: دراسة تطبيقية

بحث لنيل درجة الماجستير في الآداب تخصص: (الدراسات الإسلامية – أصول الفقه) السيد عبد الله السيد الجبان إشراف الأستاذ الدكتور الدكتور محمد أحمد شامية مسعود إبراهيم حسن أستاذ أصول الفقه المساعد كلية الدراسات الإسلامية والعربية بالمنصورة جامعة الأزهر الشريف مدرس الأدب الفارسي كلية الآداب جامعة كفر الشيخ 2018

أشكال النحت والأرساب في هضبة البطنان /ليبيا

رسالة مقدمة لنيل درجة الدكتوراه في الجغرافيا الطبيعية إعداد الطالب الدامي هلال لامين بوحويش جامعة كفر الشيخ مصر

“أثر استخدام فيديو تعليمي في اكتساب المفاهيم الحاسوبية لدى طلبة كلية العلوم التربوية في الجامعة الأردنية”

اسم الباحثة:هناء بنت محمد أبا الخيل..الجامعة الأردنية..الكلية العلوم التربوية..القسم المناهج والتدريس/ تخصص تكنولوجيا التعليم..ماجستير..2015 / 2014

“قواعد إدارية تربوية مقترحة لاتخاذ القرار الرشيد في المدارس الخاصة في مدينة الرياض بالمملكة العربية السعودية

اسم الباحثة هناء بنت محمد أبا الخيل..الجامعة الأردنية..الكلية العلوم التربوية..القسم الإدارة التربوية..دكتوراه..2017 / 2018

خدماتنا

فيما يلي استعراض أبرز خدمات المركز .. ولخدمات أخرى لم تذكر.. فضلا التواصل عبر الايميل nodom@alnodom.com.sa v  عنوان الرسالة v توفير المراجع والدراسات السابقة باللغة العربية والأجنبية vالاحصاء والتحليل vالترجمة العلمية vالنسخ والطباعة vالمراجعة

ممارسات حقوق الإنسان في سيرة أمير المؤمنين عمر بن الخطاب وتطبيقاتها التربوية في المجتمع

اسم الباحث: عبدالرحمن بن عبدالعزيز بن إبراهيم العمير. اسم المشرف: د. أحمد بن عبدالعزيز الرومي. اسم الجامعة: جامعة الإمام محمد بن سعود الإسلامية اسم الكلية: كلية العلوم الاجتماعية – قسم أصول التربية – تخصص التربية الإسلامية. العام الجامعي: 1438ه- 1439ه، الموافق 2017م - 2018م
Powered by ePublisher 2011